根据发病前的性接触史，尤其是不洁性交史，典型的临床表现和经过，较短的潜伏期后发生软而扁的丘疹、脓疱、溃疡，单侧性的化脓性淋巴结炎，直接镜检和培养检出杜克雷嗜血杆菌，PCR检测杜克雷嗜血杆菌DNA，即可作出诊断。
诊断依据：Barber氏对本病诊断作如下建议，并作为诊断标准：
①阴部溃疡，一个或多个；
②暗视野显微镜检查，梅毒螺旋体阴性；
③梅毒血清试验阴性；
④病损潜行性边缘取材涂片，用瑞氏染色未发现朵诺凡小体（肉芽肿荚膜杆菌），而用革兰氏染色可找到短小的革兰氏阴性杆菌。
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